1. Класифікація
Гель-електрофорез поділяється на вертикальний тип (включаючи стовпчасті гелі та сляби-гелі) і горизонтальні типи (переважно слаб-гелі) (рис. 6-18). Загалом, вертикальне розділення дещо перевершує горизонтальне, але горизонтальне приготування гелю має принаймні чотири переваги: існує опора під усім гелем, що дозволяє використовувати агарозу низької концентрації; можливе виготовлення пластин з агарозним гелем різної специфікації; підготовка гелю і завантаження зразка більш зручні; камера для електрофорезу проста у виготовленні та є економічною. Оскільки горизонтальний електрофорез виконується з пластиною агарозного гелю, повністю зануреною приблизно на 1 мм нижче поверхні буфера для електрофорезу, його також називають зануреним електрофорезом.
Electrophoresis Tank DYCP-31DN для електрофорезу в агарозному гелі
2.Буферна система
У розділенні нуклеїнових кислот більшість систем використовують безперервні системи. Зазвичай використовувані буфери для електрофорезу включають TBE (0,08 моль/л трис·HCl, рН 8,5, 0,08 моль/л борної кислоти, 0,0024 моль/л EDTA) буфер і ТГ (0,04 моль/л трис·HCl, pH 7,8, 0,02 моль/л). ацетат натрію, 0,0018 моль/л EDTA) буфер. Ці буфери зазвичай готують у вигляді 10-кратних базових розчинів і розбавляють до необхідної концентрації під час використання. Швидкість міграції лінійної та кільцевої ДНК в агарозному гелі залежить від використовуваного буфера. У буфері THE швидкість міграції лінійної ДНК більша, ніж у кільцевої ДНК, тоді як у буфері TBE все навпаки.
3. Приготування агарозного гелю
(1) Приготування горизонтального агарозного гелю
(a) Приготуйте необхідну концентрацію агарозного гелю, використовуючи 1x буфер для електрофорезу.
(b) Нагрійте агарозу до повного розчинення на киплячій водяній бані, на магнітній мішалці або в мікрохвильовій печі. Охолодіть розчин агарози до 55°C і додайте барвник бромід етидію (EB) до кінцевої концентрації 0,5 мкг/мл.
(c) Запечатайте краї скляних або акрилових пластин невеликою кількістю агарозного гелю, додайте гребінець і розмістіть зубці гребінця приблизно на 0,5–1,0 мм над пластиною.
(d) Безперервно вливайте розплавлений розчин агарозного гелю в скляну або акрилову форму (товщина залежить від об’єму зразка ДНК), уникаючи введення бульбашок повітря. Дайте йому застигнути природним шляхом при кімнатній температурі.
(e) Обережно видаліть гребінець після повного затвердіння. Додайте відповідну кількість буфера для електрофорезу в резервуар для гелю, переконавшись, що пластина з гелем занурена приблизно на 1 мм нижче поверхні буфера для електрофорезу.
(2) Приготування вертикального агарозного гелю
(a) Видаліть жир або залишки зі скляних пластин промиванням етанолом.
(b) Розмістіть розпірні пластини між передньою та задньою перегородками, вирівняйте краї розпірних пластин із передньою та задньою перегородками та закріпіть їх затискачами.
(c) Додайте 2% агарози в 1x буфері між краями роздільних пластин, щоб утворити пробку з агарози висотою 1 см на дні камери для лиття гелю.
(d) Вилийте розплавлений агарозний гель бажаної концентрації, приготований у 1x буфері, у камеру для гелю на 1 см нижче верху.
(e) Вставте гребінець, уникаючи потрапляння бульбашок повітря під зубці гребінця. Іноді під час охолодження агарозного гелю на зубцях гребінця можуть з’являтися зморшки; у таких випадках просто додайте трохи розплавленої агарози зверху, щоб затвердіти.
(f) Зніміть гребінець. Щоб запобігти витіканню буфера в отвір для завантаження, ущільніть з’єднання між пластиною з агарозним гелем і камерою для електрофорезу 2% розчином агарози та додайте необхідну кількість буфера.
(g) Додайте 1x буфер для електрофорезу в гелеву камеру.
(h) Обережно завантажте зразки ДНК на агарозний гель під буфером.
Більше інформації про базові знання про електрофорез у агарозному гелі ми поділимося наступного тижня. Бажаємо, щоб ця інформація була корисною для вашого експерименту.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) більше 50 років спеціалізується на виробництві інструментів для електрофорезу з нашою власною професійною технічною командою та науково-дослідним центром. Ми маємо надійну та повну виробничу лінію від проектування до перевірки, склад, а також маркетингову підтримку. Нашою основною продукцією є комірка для електрофорезу (резервуар/камера), джерело живлення для електрофорезу, синій світлодіодний трансілюмінатор, УФ-трансілюмінатор, система гелевого зображення та аналізу тощо.
Зараз ми шукаємо партнерів, вітаємо як резервуар для електрофорезу OEM, так і дистриб’юторів.
Якщо у вас є будь-який план придбання наших продуктів, будь ласка, не соромтеся зв’язатися з нами. Ви можете надіслати нам повідомлення на електронну пошту[електронна пошта захищена]або[електронна пошта захищена], або зателефонуйте нам за номером +86 15810650221 або додайте Whatsapp +86 15810650221 або Wechat: 15810650221.
Відскануйте QR-код, щоб додати його в Whatsapp або WeChat.
Час публікації: 07 грудня 2023 р