Пробопідготовка таЗавантаження
Завдяки використанню безперервної буферної системи без укладання гелю в більшості випадків зразки повинні мати відповідну концентрацію та невеликий об’єм. Використовуйте aпіпеткаповільно додавати зразок, з 5-10 мкг на лунку, щоб уникнути значного зниження роздільної здатності. Колизавантажувальний зразок, необхідно вимкнути живлення. Зразок повинен містити барвник-індикатор (0,025% бромфенолового синього або помаранчевого) і сахарозу (10-15%) або гліцерин (5-10%) для підвищення його густини, концентрації проби і запобігання дифузії. Однак інколи сахароза або гліцерин можуть спричинити U-подібні смуги в результатах електрофорезу, чого можна уникнути, використовуючи 2,5% фікол (полівінілпіролідон).
Електрофорез
Напруга для електрофорезу становить 5-15 В/см, зазвичай близько 10 В/см. Для розділення великих молекул напруга повинна бути нижчою, зазвичай не перевищує 5 В/см.
Фарбування
Флуоресцентний барвник бромід етидію (EB) зазвичай використовується для фарбування для спостереження за смугами ДНК в агарозному гелі. EB може вставлятися між парами основ молекули ДНК, змушуючи EB зв’язуватися з ДНК. Поглинання ультрафіолетового світла 260 нм ДНК передається EB, і зв’язаний EB випромінює флуоресценцію при 590 нм у червоно-оранжевій області спектру видимого світла. Фарбування гелю в 1 ммоль/л розчині MgSO4 протягом 1 години може зменшити фонову флуоресценцію, спричинену незв’язаним EB, полегшуючи виявлення невеликих кількостей ДНК.
Барвник EB має ряд переваг: він простий у використанні, не руйнує нуклеїнові кислоти, має високу чутливість і може фарбувати як ДНК, так і РНК. EB можна додати до зразка та відстежувати за допомогою УФ-поглинання в будь-який час. Після фарбування EB можна видалити екстракцією н-бутанолом.
Однак барвник EB є сильним мутагеном, тому під час роботи з ним слід вживати запобіжних заходів, наприклад одягати поліетиленові рукавички. Акридиновий оранжевий також є широко використовуваним барвником, оскільки він може розрізняти одноланцюгові та дволанцюгові нуклеїнові кислоти (ДНК, РНК). Він демонструє зелену флуоресценцію (530 нм) для дволанцюгових нуклеїнових кислот і червону флуоресценцію (640 нм) для одноланцюгових нуклеїнових кислот. Крім того, для фарбування можна використовувати інші барвники, такі як метиленовий синій, метиленовий зелений і хінолін B.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) більше 50 років спеціалізується на виробництві інструментів для електрофорезу з нашою власною професійною технічною командою та науково-дослідним центром. Ми маємо надійну та повну виробничу лінію від проектування до перевірки, склад, а також маркетингову підтримку. Нашою основною продукцією є комірка для електрофорезу (резервуар/камера), джерело живлення для електрофорезу, синій світлодіодний трансілюмінатор, УФ-трансілюмінатор, система гелевого зображення та аналізу тощо.
Зараз ми шукаємо партнерів, вітаємо як резервуар для електрофорезу OEM, так і дистриб’юторів.
Якщо у вас є будь-який план придбання наших продуктів, будь ласка, не соромтеся зв’язатися з нами. Ви можете надіслати нам повідомлення на електронну пошту[електронна пошта захищена]або[електронна пошта захищена], або зателефонуйте нам за номером +86 15810650221 або додайте Whatsapp +86 15810650221 або Wechat: 15810650221.
Відскануйте QR-код, щоб додати його в Whatsapp або WeChat.
Час публікації: 20 грудня 2023 р