вступ
Гель-електрофорез є фундаментальним методом у молекулярній біології, який широко використовується для розділення білків, нуклеїнових кислот та інших макромолекул. Належний контроль об’єму зразка, напруги та часу електрофорезу має вирішальне значення для досягнення точних і відтворюваних результатів.Наш колега по лабораторії пропонуєнайкращі практики керування цими параметрами під час гель-електрофорезу SDS-PAGE.
Продукти гель-електрофорезу Beijing Liuyi Biotechnology
Обсяг зразка: забезпечення консистенції
Під час електрофорезу SDS-PAGE об’єм зразка є ключовим фактором, який може значно вплинути на роздільну здатність ваших результатів. Зазвичай рекомендується завантажувати 10 мкл загального білка на лунку. Щоб забезпечити узгодженість і запобігти дифузії зразка між сусідніми лунками, важливо завантажувати рівний об’єм 1x завантажувального буфера в будь-які порожні лунки. Цей запобіжний захід допомагає запобігти розповсюдженню зразків на сусідні смуги, що може статися, якщо колодязь залишити порожнім.
Перед завантаженням зразків завжди починайте з додавання маркера молекулярної маси в одну лунку. Це дозволяє легко визначити розмір білка після електрофорезу.
Контроль напруги: балансування швидкості та роздільної здатності
Напруга, що застосовується під час електрофорезу, безпосередньо впливає як на швидкість, з якою зразки мігрують через гель, так і на роздільну здатність поділу. Для SDS-PAGE бажано починати з низької напруги близько 80 В. Ця початкова низька напруга дозволяє зразкам мігрувати повільно та рівномірно, концентруючи їх у різку смугу, коли вони потрапляють у розділовий гель.
Після того, як зразки повністю увійшли в розділовий гель, напругу можна збільшити до 120 В. Ця висока напруга прискорює міграцію, забезпечуючи ефективне розділення білків відповідно до їх молекулярної ваги. Важливо стежити за просуванням фронту барвника бромфенолового синього, що вказує на завершення електрофорезу. Для гелів з концентрацією 10-12% зазвичай достатньо 80-90 хвилин; однак для 15% гелів вам може знадобитися трохи подовжити час роботи.
Управління часом: знати, коли зупинитися
Час є ще одним важливим фактором у гель-електрофорезі. Надто довгий або занадто короткий період роботи гелю може призвести до неоптимального розділення. Міграція бромфенолового синього барвника є корисним індикатором: коли він досягає дна гелю, зазвичай настає час припинити рух. Для стандартних гелів, таких як 10-12%, зазвичай достатньо електрофорезу приблизно 80-90 хвилин. Для гелів із вищим відсотком, наприклад 15%, час роботи слід подовжити, щоб забезпечити повне відділення білків.
Управління буферами: повторне використання та підготовка буферів
Буфер для електрофорезу можна повторно використовувати 1-2 рази, залежно від конкретних умов вашої лабораторії. Однак для отримання оптимальних результатів рекомендується готувати свіжий 10-кратний буфер і розводити його безпосередньо перед використанням. Це гарантує збереження ефективності буфера, що забезпечує більш надійні результати електрофорезу.
Продукти гель-електрофорезу Beijing Liuyi Biotechnology
Ретельно контролюючи об’єм зразка, напругу та час електрофорезу, ви можете значно підвищити точність і відтворюваність результатів електрофорезу в гелі. Застосування цих найкращих практик у вашій лабораторній роботі допоможе вам отримати чіткіші та чіткіші смуги, що призведе до кращих даних для подальшого аналізу.
Якщо у вас є інші хороші методи оптимізації експерименту з електрофорезу в гелі, ласкаво просимо до обговорення з нами!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) більше 50 років спеціалізується на виробництві інструментів для електрофорезу з нашою власною професійною технічною командою та науково-дослідним центром. Ми маємо надійну та повну виробничу лінію від проектування до перевірки, склад, а також маркетингову підтримку. Нашою основною продукцією є комірка для електрофорезу (резервуар/камера), джерело живлення для електрофорезу, синій світлодіодний трансілюмінатор, УФ-трансілюмінатор, система гелевого зображення та аналізу тощо. Ми також постачаємо лабораторні інструменти, такі як інструмент ПЛР, вихровий змішувач і центрифуга для лабораторії.
Якщо у вас є будь-який план придбання наших продуктів, будь ласка, не соромтеся зв’язатися з нами. Ви можете надіслати нам повідомлення на електронну пошту[електронна пошта захищена]або[електронна пошта захищена], або зателефонуйте нам за номером +86 15810650221 або додайте Whatsapp +86 15810650221 або Wechat: 15810650221.
Відскануйте QR-код, щоб додати його в Whatsapp або WeChat.
Час публікації: 20 серпня 2024 р