Що таке електрофорез у поліакриламідному гелі?

Електрофорез у поліакриламідному гелі

Гель-електрофорез є фундаментальною технікою в лабораторіях біологічних дисциплін, яка дозволяє розділяти макромолекули, такі як ДНК, РНК і білки. Різні середовища та механізми розділення дозволяють більш ефективно розділяти підгрупи цих молекул, використовуючи їхні фізичні характеристики. Зокрема, для білків електрофорез у поліакриламідному гелі (PAGE) часто є технікою вибору.

PAGE — це техніка, яка розділяє макромолекули, наприклад білки, на основі їх електрофоретичної рухливості, тобто здатності аналітів рухатися до електрода з протилежним зарядом. У PAGE це визначається зарядом, розміром (молекулярною масою) і формою молекули. Аналіти рухаються через пори, утворені в поліакриламідному гелі. На відміну від ДНК і РНК, білки відрізняються за зарядом залежно від включених амінокислот, що може впливати на їх роботу. Нитки амінокислот також можуть утворювати вторинні структури, які впливають на їх видимий розмір і, відповідно, на те, як вони здатні рухатися крізь пори. Тому іноді може бути бажано денатурувати білки перед електрофорезом, щоб лінеаризувати їх, якщо потрібна більш точна оцінка розміру.

СТОРІНКА SDS

Електрофорез у поліакриламідному гелі з додецилсульфатом натрію — це техніка, яка використовується для розділення білкових молекул масою від 5 до 250 кДа. Білки поділяються виключно на основі їх молекулярної маси. Додецилсульфат натрію, аніонна поверхнево-активна речовина, додається під час приготування гелів, який маскує внутрішні заряди зразків білків і надає їм подібне співвідношення заряду до маси. Простіше кажучи, він денатурує білки і надає їм негативний заряд.

Рідна СТОРІНКА

Native PAGE — це техніка, яка використовує неденатуровані гелі для розділення білків. На відміну від SDS PAGE, при приготуванні гелів не додається денатуруючий агент. У результаті поділ білків відбувається на основі заряду та розміру білків. У цій техніці конформація, згортання та амінокислотні ланцюги білків є факторами, від яких залежить поділ. Білки не пошкоджуються в цьому процесі і можуть бути відновлені після завершення розділення.

Як працює електрофорез у поліакриламідному гелі (PAGE)?

Основним принципом PAGE є розділення аналітів шляхом пропускання їх через пори поліакриламідного гелю за допомогою електричного струму. Для цього суміш акриламід-бісакриламід полімеризують (поліакриламід) шляхом додавання персульфату амонію (APS). Реакція, яка каталізується тетраметилетилендіаміном (TEMED), утворює сітчасту структуру з порами, через які аналіти можуть рухатися (рис. 2). Чим вищий відсоток загального вмісту акриламіду в гелі, тим менший розмір пор, отже, тим менші білки зможуть пройти крізь них. Співвідношення акриламіду до бісакриламіду також впливає на розмір пор, але воно часто залишається постійним. Менші розміри пор також зменшують швидкість, з якою дрібні білки здатні рухатися крізь гель, покращуючи їх роздільну здатність і запобігаючи їх швидкому витіканню в буфер під час подачі струму.

Обладнання для електрофорезу в поліакриламідному гелі

Комірка для гель-електрофорезу (бак/камера)
Резервуар для гелю для електрофорезу в поліакриламідному гелі (PAGE) відрізняється від резервуара для агарозного гелю. Резервуар для агарозного гелю горизонтальний, а резервуар для PAGE – вертикальний. За допомогою камери для вертикального електрофорезу (резервуар/камера) тонкий гель (зазвичай 1,0 мм або 1,5 мм) наливають між двома скляними пластинами та встановлюють так, щоб нижня частина гелю була занурена в буфер в одній камері, а верхня частина була занурена в буфер. в іншій камері. Коли подається струм, невелика кількість буфера мігрує через гель з верхньої камери в нижню. Завдяки міцним затискачам, які гарантують, що вузол залишається у вертикальному положенні, обладнання забезпечує швидку роботу гелю з рівномірним охолодженням, що призводить до чітких смуг.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) виробляє різні розміри комірок для електрофорезу в поліакриламідному гелі (баки/камери). Моделі DYCZ-20C і DYCZ-20G являють собою камери вертикального електрофорезу (резервуари/камери) для аналізу секвенування ДНК. Деякі камери для вертикального електрофорезу (резервуари/камери) сумісні з системою блотінгу, як-от модель DYCZ-24DN, DYCZ-25D і DYCZ-25E сумісні з системою Western Blotting моделі DYCZ-40D, DYCZ-40G і DYCZ-40F, які використовуються для перенесення білкової молекули з гелю на мембрану. Після електрофорезу SDS-PAGE вестерн-блотінг — це техніка для виявлення специфічного білка в білковій суміші. Ви можете вибрати ці блот-системи відповідно до експериментальних вимог.

Джерело живлення для електрофорезу
Щоб забезпечити електрику для роботи гелю, вам знадобиться джерело живлення для електрофорезу. У Liuyi Biotechnology ми надаємо ряд джерел живлення для електрофорезу для всіх застосувань. Моделі DYY-12 і DYY-12C з високою стабільною напругою та струмом можуть задовольнити вимоги електрофорезу високої напруги. Він має функцію підставки, часу, VH і покрокового застосування. Вони ідеально підходять для електрофорезу IEF і секвенування ДНК. Для загального застосування електрофорезу білка та ДНК у нас є моделі DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 тощо, які також є гарячими джерелами живлення з осередками для електрофорезу (баками/камерами). Їх можна використовувати для електрофорезу середньої та низької напруги, наприклад, у шкільних лабораторіях, лікарняних лабораторіях тощо. Більше моделей блоків живлення дивіться на нашому сайті.

Бренд Liuyi має більш ніж 50-річну історію в Китаї, і компанія може надавати стабільні та високоякісні продукти по всьому світу. Завдяки рокам розвитку, він гідний вашого вибору!

Для отримання додаткової інформації про нас, будь ласка, зв'яжіться з нами електронною поштою[електронна пошта захищена] or [електронна пошта захищена].

Посилання на Що таке електрофорез у поліакриламідному гелі?
1. Карен Стюард, доктор філософії. Електрофорез у поліакриламідному гелі, як це працює, варіанти техніки та її застосування