Кометний аналіз (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) — це чутлива та швидка техніка, яка в основному використовується для виявлення пошкодження та відновлення ДНК в окремих клітинах. Назва «Кометний аналіз» походить від характерної форми комети, яка з’являється в результатах: ядро клітини утворює «голову», тоді як пошкоджені фрагменти ДНК мігрують, створюючи «хвіст», схожий на комету.
Принцип
Принцип Comet Assay заснований на міграції фрагментів ДНК в електричному полі. Неушкоджена ДНК залишається в ядрі клітини, тоді як пошкоджена або фрагментована ДНК мігрує до анода, утворюючи «хвіст» комети. Довжина та інтенсивність хвоста прямо пропорційні ступеню пошкодження ДНК.
Процедура
- Підготовка клітин: Досліджувані клітини змішують з агарозою з низькою температурою плавлення та розподіляють на предметних склі для утворення однорідного шару.
- Лізис клітин: предметні стекла занурюють у розчин для лізису, щоб видалити клітинну мембрану та ядерну мембрану, оголюючи ДНК.
- Електрофорез: Предметні скла поміщають у камеру для електрофорезу в лужних або нейтральних умовах. Пошкоджені фрагменти ДНК під дією електричного поля мігрують до позитивного електроду.
- Фарбування: Після електрофорезу предметні скла фарбують флуоресцентним барвником (наприклад, бромістим етидієм) для візуалізації ДНК.
- Мікроскопічний аналіз: за допомогою флуоресцентного мікроскопа або спеціального програмного забезпечення аналізуються форми комет і вимірюються такі параметри, як довжина хвоста та інтенсивність.
Зображення з біорендера
Аналіз даних
Результати Comet Assay оцінюються на основі кількох ключових параметрів:
- Довжина хвоста: Відстань, на яку мігрує ДНК, що вказує на ступінь пошкодження ДНК.
- Вміст ДНК хвоста: Відсоток ДНК, яка мігрує в хвіст, часто використовується як кількісна міра пошкодження ДНК.
- Olive Tail Moment (OTM): поєднує довжину хвоста та вміст ДНК у хвості, щоб забезпечити більш комплексне вимірювання пошкодження ДНК.
Додатки
- Дослідження генотоксичності: Comet Assay широко використовується для оцінки впливу хімічних речовин, ліків і радіації на клітинну ДНК, що робить його ключовим інструментом для тестування на генотоксичність.
- Екологічна токсикологія: допомагає аналізувати вплив забруднювачів навколишнього середовища на ДНК організмів, надаючи уявлення про безпеку екосистеми.
- Медичні та клінічні дослідження: Comet Assay використовується для вивчення механізмів відновлення ДНК, раку та інших захворювань, пов’язаних з ДНК. Він також оцінює вплив лікування раку, наприклад променевої терапії та хіміотерапії, на ДНК.
- Харчові та сільськогосподарські науки: Використовується для оцінки безпеки пестицидів, харчових добавок та інших речовин, а також для вивчення їх токсичних ефектів на моделях тварин.
Переваги
- Висока чутливість: Здатність виявляти низькі рівні пошкодження ДНК.
- Проста експлуатація: Техніка проста, що робить її придатною для високопродуктивного скринінгу.
- Широке застосування: Його можна застосовувати до різних типів клітин, включаючи клітини тварин і рослин.
- Проблеми кількісного визначення: Надаючи якісні дані про пошкодження ДНК, кількісний аналіз значною мірою покладається на програмне забезпечення та методи аналізу зображень.
- Умови експерименту: На результати можуть впливати такі фактори, як тривалість електрофорезу та pH, що вимагає ретельного контролю умов експерименту.
Обмеження
Comet Assay є безцінним інструментом у біомедичних дослідженнях, науці про навколишнє середовище та розробці ліків завдяки своїй гнучкості та високій чутливості у виявленні пошкоджень та відновлення ДНК. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)пропонує камеру горизонтального електрофорезу для кометного аналізу. Ласкаво просимо зв’язатися з нами, щоб обговоритиАналіз кометпротокол.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) більше 50 років спеціалізується на виробництві інструментів для електрофорезу з нашою власною професійною технічною командою та науково-дослідним центром. Ми маємо надійну та повну виробничу лінію від проектування до перевірки, склад, а також маркетингову підтримку. Нашою основною продукцією є комірка для електрофорезу (резервуар/камера), джерело живлення для електрофорезу, синій світлодіодний трансілюмінатор, УФ-трансілюмінатор, система гелевого зображення та аналізу тощо. Ми також постачаємо лабораторні інструменти, такі як інструмент ПЛР, вихровий змішувач і центрифуга для лабораторії.
Якщо у вас є будь-який план придбання наших продуктів, будь ласка, не соромтеся зв’язатися з нами. Ви можете надіслати нам повідомлення на електронну пошту[електронна пошта захищена]або[електронна пошта захищена], або зателефонуйте нам за номером +86 15810650221 або додайте Whatsapp +86 15810650221 або Wechat: 15810650221.
Відскануйте QR-код, щоб додати його в Whatsapp або WeChat.
Час публікації: 20 вересня 2024 р