Експеримент із розділення сироваткового білка методом електрофорезу з ацетатцелюлозної мембрани

Принцип

Електрофорез ацетатно-целюлозної плівки — це метод електрофорезу з використанням плівки ацетату целюлози як основи.Явище, при якому під дією електричного поля заряджені частинки рухаються до протилежного електрода, називається електрофорезом.Оскільки кожен білок має певну ізоелектричну точку, якщо білок помістити в розчин із рН, нижчим за його ізоелектричну точку, білок буде позитивно зарядженим і рухатиметься до негативного електрода.Навпаки, він рухається до позитивного полюсу.Оскільки швидкість руху білкових молекул в електричному полі пов’язана з їх зарядом, формою та розміром молекул, різні білки можна розділяти за допомогою електрофорезу.Сироватка містить різноманітні білки, усі з яких мають ізоелектричні точки при рН 7,5 або менше.Коли сироватку поміщають у буфер з рН 8,6 для проведення електрофорезу, усі сироваткові білки заряджені негативно та рухатимуться в електричному полі до позитивної сторони.Оскільки різні сироваткові білки мають різні заряди при однаковому рН, молекулярні частинки відрізняються за розміром, і, отже, швидкість міграції різна, і вони розділяються за допомогою електрофорезу.Ізоелектричні точки та молекулярні маси сироваткових білків наведено в таблиці нижче:

Експеримент полягає у розділенні різних білків у сироватці крові за допомогою мембрани з ацетату целюлози (скорочено CAM) як середовища підтримки.CAM - це різновид спіненого лосуeплівка з хорошою однорідністю, а товщина становить 0,1 мм-1,5 мм, яка має певне водопоглинання.

Матеріали, прилади та реактиви для CAM електрофорезу

Зразки:здорової сироватки крові людини

інструмент:джерело живлення DYY-6C, резервуар для електрофорезу DYCP-38C, чудове завантаження зразка WD-9404

Реагенти

1) мембрана ацетатцелюлозна 7X9см

2) буферний розчин барбітолу PH 8,6 (іонна сила 0,05-0,09, це 0,06 tid часу): візьміть 1,84 г діетилбарбітурової кислоти, а потім візьміть 1,03 г пентобарбіталу діетилнатрію, додайте трохи дистильованої води, щоб нагріти для розчинення, і доведіть до 1000 мл;

3) Пляма: Ponceau S 0,2 г, трихлороцтової кислоти 3 г, додати 100 мл дистильованої води;

4) TBS/T або PBS/T: 45 мл 95% етанолу, 5 мл крижаної оцтової кислоти, додати 50 мл дистильованої води;

5) Миючий розчин: 70 мл безводного етанолу, 30 мл крижаної оцтової кислоти.

Експеримент Метоd

1) Підготуйте мембрану: занурте мембрану в буферний розчин барбітолу на 30 хвилин-8 годин, вийміть її, видаліть зайвий розчин абсорбуючим папером.

2) Завантаження зразків: розрізняйте шорстку та гладку сторону мембрани та позначте лінію на відстані 1,5 см до верхнього кінця на шорсткій стороні.Завантажте зразки за допомогою найкращого інструменту для завантаження зразків шорсткою стороною.Примітка: Зразки слід завантажувати шорсткою стороною мембрани.Після того, як зразки сироватки повністю проникнуть у мембрану, переверніть мембрану, покладіть шорсткою стороною (із зразками) донизу до ємності, а кінець із зразками помістіть у негативний електрод.

3) Електрофорез: Увімкніть джерело живлення, 0,4～Мембрана 0,6 м А/см, час роботи 30-45 хв.Після закінчення електрофорезу вимкніть живлення.

4) Пофарбуйте та очистіть: вийміть мембрану з резервуара та занурте їїit у розчин барвника протягом 5 хвилин, а потім очистіть його в розчині для чищення знову і знову протягом 3-4 разів, доки колір фону не стане чистим.Сироваткові білки повинні бути показані на смугах, і зазвичай є п’ять зон, які утворюють верхній кінець позначеної лінії, альбумін, α1-глулін, α2-глулін, β-глулін, γ-глулін.

5) Консервація: поставити сухий електрофорезгуртв миючому розчині на 10-15 хвилин, а потім вийміть і наклейте на чисте скло, після висихання воно стане прозорою плівкоюгурт.

ЕкспериментуйтеРезультат

Ефект розділення зразків сироватки хороший, і немає явища хвостової смуги.Повторюваність результатів залежить від процедур тестування та методів експериментатора, і повторюваність висока.

Висновок

Швидка система виявлення клінічного електрофорезу (Ємність для електрофорезуDYCP-38C,живленняDYY-6C і WD-9404 з чудовим завантаженням зразків), виготовлені нашимикомпанія Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdвідповідає експериментальним вимогам,ірезультати відтворювані, прості та швидкі, придатні длянавчаннядослідження.

Пекін ЛюїBiotechnology Co., Ltd спеціалізується на виробництві продуктів для електрофорезу для галузі наук про життя, якімає більш ніж 50-річну історію в Китаї, і компанія може надавати стабільні та високоякісні продукти по всьому світу.Завдяки рокам розвитку, він гідний вашого вибору!

Зараз ми шукаємо партнерів, вітаємо як резервуар для електрофорезу OEM, так і дистриб’юторів.

Для отримання додаткової інформації про нас, будь ласка, зв'яжіться з нами електронною поштою[електронна пошта захищена]або[електронна пошта захищена].